多肽固相合成法是多肽合成有机化学的一个重大的提升,它的最大的优点是不必纯化中间物质,合成过程能够连续进行,进而为多肽合成的自动化奠定了基础,目前全自动多肽的合成,基本上都是固相合成,那么多肽合成工艺流程有哪些呢?今天小编在下面给大家做详细的解答。
多肽合成的工艺流程:
A,环氧树脂选择及氨基酸的固定
用作多肽合成的高分子的载体一般分为3类:交联聚乙烯;聚酰胺:聚乙烯一乙二醇脂类环氧树脂。氨基酸的固定主要是通过保护的氨基酸的羧基同环氧树脂反应基团之间产生共价键去实现。
B,氨基、羧基、侧链的保护及脱除
能够成功合成具有特定的氨基酸顺序的活性多肽,需要对暂时不需要参与转变成酰胺键的氨基和羧基对其进行保护,同时对氨基酸侧链上的极性基团也需要保护,反应完成之后然后再把保护基团除去,近几年来,FMOC合成法得到广泛应用。羧基一般使用转变成酯基的方式进行保护。甲酯和乙酯是逐步生成中保护羧基比较常用的方式。
C,成肽反应
固相中的成肽反应一般是把两个相应的氨基被保护的及羧基被保护的氨基酸放到溶液内并不转变成肽键,要形成酰胺键,最常用的手段是把羧基活化,变成混合酸酐、活泼酯、酰氯或用强的缩合剂(如碳二亚氨)转变成对称酸酐等方法来转变成酰胺键。
D,裂解及合成肽链的纯化
BOC法用TFA+HF裂解和脱侧链保护基,FMOC法直接使用TFA,有时根据条件有所不同,其它碱、光解、氟离子和氢解等脱保护方式也被采用。合成肽链更进一步精制、分离与纯化通常采用高效液相色谱、亲和层析、毛细管电泳等。
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