2.活化:保护好的氨基酸需要被活化,使其具有反应性,以便与下个氨基酸来进行缩合反应。最常用的活化试剂有碳酸二(二苯基)酯(DCC)和1-羟基苕酸(HOBt)等。
3.缩合反应:活化的氨基酸与下个保护好的氨基酸来进行缩合反应,形成一个全新的肽键。反应条件也可以采用水溶液相或固相合成的方法。在水溶液相生成中,反应通常是在有机溶剂中进行,加入适量碱催化剂。在固相生成中,氨基酸被固定于固相支持上,反应在固相中进行。
4.重复缩合反应:根据所需要的多肽编码序列的长度,重复来进行缩合反应,逐渐扩大多肽链的长度。
5.去除保护基团:完成多肽合成后,必须要去除保护基团,恢复正常氨基酸自由官能团。
6.纯化与分析:生成所得到的多肽要进行纯化,一般采用色谱技术(如逆向相色谱、凝胶过滤等)来分离和纯化多肽。分离纯化后,可以用质谱、核磁共振等方式进行结构类型分析和确认。
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