随着医学的研究发展,多肽作为一种功能活性成分被广泛应用于药品和化妆品生产中,多肽合成药物是医学里面不可或缺的一种成分因素,那么固相合成多肽的步骤有哪些呢?今天小编在下面给大家做详细的解答。
A,树脂选择及氨基酸的固定
用作多肽合成的高分子的载体主要有3类:交联聚苯乙烯;聚酰胺:聚乙烯一乙二醇脂类树脂。氨基酸的固定主要通过保护的氨基酸的羧基同树脂反应基团之间形成共价键来完成。
B,氨基、羧基、侧链的保护及去除
要成功合成具备特定的氨基酸先后顺序多肽,必须对暂不参与形成酰胺键的氨基和羧基加以保护,并且对氨基酸侧链上面的活性基团也需要保护,反应完成之后然后将保护基团除去,近些年,FMOC合成法得到广泛应用。羧基一般采用形成酯基的方式进行保护。甲酯和乙酯是逐步合成中保护羧基比较常用的方法。
C,成肽反应
固相中的成肽反应一般都是把两个相应的氨基被保护的及羧基被保护的氨基酸放到溶液内并不形成肽链,要形成酰胺键,经常使用的方法是把羧基活化,转变成混合酸酐、活泼酯、酰氯或用强的缩合剂(如碳二亚氨)形成对称酸酐等方式来形成酰胺键。
D,裂解及合成多肽链的纯化
BOC法用TFA+HF裂解和脱侧链保护基,FMOC法可以直接用TFA,有时候根据条件有所不同,其它碱、光解、氟离子和氢解等脱保护方法也被采用。合成多肽链更进一步精制、分离与纯化一般采用高效液相色谱、亲和层析、毛细管电泳等。
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